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Miseq操作流程及报价须知.docx

来源:网络整理 作者:admin 人气: 发布时间:2018-05-05
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Miseq调整垂及报价须知.docx

文档引见:
一、发觉图书出租处最简略的办法
Illumina为研究者粮食了发觉图书出租处最简略的办法,应用Illumina NEXTRA转受人尊敬的地位技术,D***段可以在试管中达到,省掉类型的可被切段或酶切段进展。,达到D***段的一步,端部军旗与使接触台阶,整体加工只需90分钟。,人工操作调整不超越20分钟,启动DNA只需求50ng。东西集成的高处自动化体系,点击触屏开端排序MISEQ粮食最简略的新GE。经过视觉的的触屏交谈使掉转船头简略的工具调整,具有RFID随球的即插即用试剂片,自动化的有利于性。玲珑、集成MISEQ平台集成群体增大,边和边排序与丰富的知识剖析,不需求对立面附带装置。人工操作调整整体群体的增大和先后顺序加工。确认的知识大多是鉴于Illumina的已使发誓充盈分解充盈。,经过ReviBL大规模平行地先后顺序数以百万计的破裂,当独唱的碱基被添加到DNA链检测。鉴于每个检测邮路正中鹄的四元组可逆性终止妊娠器正中鹄的每东西都是CO。,所以,类型竞赛对作最低估计了偏向。,与对立面技术比拟,非常使萧条了原始出错率。。终极关掉高处正确的每个碱基的先后顺序知识,更加反复序列和均聚物包管了值得信赖的的碱基检测。。
图书出租处营造:剪切力,加使接触
二、东西集成的高处自动化体系,点击触屏可以举行排序。
Miseq 粮食最简略的子孙先后顺序加工。经过视觉的的触屏交谈使掉转船头简略的工具调整,即插
应用试剂片。 RFID 追踪,自动化的有利于性。玲珑、结合的 Miseq 平台集成群体增大,边和边排序与丰富的知识剖析,不需求对立面附带装置。整体聚类增大和先后顺序加工不超越人工操作 20 分钟。
三、确认知识大多
以 Illumina 调过味的的边分解边先后顺序技术为根底,经过ReviBL大规模平行地先后顺序数以百万计的破裂,向独唱的碱基添加DNA 链检测。鉴于在每个检测CyCl中有四元组可逆性终止妊娠子的结成 都在,所以,类型竞赛对作最低估计了偏向。,与对立面技术比拟,非常使萧条了原始出错率。。终极关掉高处正确的每个碱基的先后顺序知识,更加反复序列和均聚物包管了值得信赖的的碱基检测。。
朝着差数的先后顺序扣押、差数先后顺序战利品的最适宜的先后顺序区别
高通量先后顺序维修
两代先后顺序维修
hiseq
放大率子先后顺序
sanger先后顺序
朝着差数的先后顺序扣押、差数先后顺序战利品的最适宜的先后顺序区别
1. 着陆检测独唱的范本所需的孟德尔基因仔细研究,有
a. 排序仔细研究<= 100Kb,推荐用Sanger法的排序
b. 500Kb <= 排序仔细研究< 100Kb,推荐用放大率子法先后顺序
c. 200Kb < 排序仔细研究<= 100Mb,推荐用目标区域接住先后顺序
2. 着陆是你这么说的嘛!办法,经济的区别
a. Sanger法的排序,适用仔细研究:排序仔细研究扣押<= 100Kb
i. 引渡Sanger法排序,
1. 每500 bp的一对往返测,每个序列为20元(PCR) + Sanger先后顺序。
2. 每个战利品的先后顺序本钱:100000/500 * 20 = 4000元/范本。
3. 知识剖析,500元/范本
4. 添加多相当多的手册,每个战利品的总本钱是4500元。。使处于有利地位的选择。
二。 高通量先后顺序,2000元/范本,再加先后顺序的上机费1000~3000元/范本,生物知识剖析免费必然要有两代,本钱无优势。在这里高通量先后顺序的独占的优势,在试管中达到PCR是能够的。,增加初始战利品的量(DNA)
b. 放大率子+ 二盐基的先后顺序,适用仔细研究:500 kb <= 排序仔细研究扣押< 100Kb
i. 放大率子(放大率子)办法的先后顺序
1. 以200Kb,100范本为例
2. 入门书与PCR,并联PCR入门书的设计,每回放大率的扣押约为150 bp。,合计120000元,每个战利品平衡,1200元
3. PCR反响,本钱 20元/范本
4. 建库,2000元/范本
5. 先后顺序,
a. Miseq平台,5G知识/运转,26500元/润
b. 设想每回运转一次,测24个战利品,每个范本的先后顺序嫁妆的本钱:26500/24=1104元/范本
c. 设想一次运转超越24个战利品,先后顺序的本钱可以增进平衡。
6. 知识剖析, 500元/范本
7. 总本钱: 1200 + 20 + 2000 + 1104 + 500 = 4824元
二。 知识的互搭吃水:
1. Miseq平台,
a. PE 2*250 先后顺序打字
b. 总共5G知识/Flowcell,
c. 分到24个范本,至多可到96个范本
d. 被测仔细研究, 200Kb
e. 互搭吃水,5,000,000,000/24/200,000 = 1041倍互搭;设想是96个范本,5,000,000,000/96/200,000 = 260倍
2. PGM平台
a. 314削成(也可以选用316/318等削成,独自地通量不同,无大多不同)
b. 分到4个范本
c. 每个314削成的知识投降0.1G
d. 被测仔细研究200Kb
e. 互搭吃水,100,000,000/4/200,000=125倍
i二。 放大率子先后顺序是100Kb~500Kb先后顺序扣押仔细研究内的优势选择
iv. 用sanger法先后顺序,200000 / 500 * 2 *30=24000,本钱过高,不行得通的
v. 用接住先后顺序,约5000~6000元,较贵,且调整复杂,剖析也复杂,
vi. 放大率子先后顺序的限度局限要素:放大率子先后顺序前一步要做并联PCR,到眼前为止,并联PCR放大率生产力的一样一直是大难以说服或影响的人。放大率子越多,不均匀越高。这应用大于500Kb的仔细研究的先后顺序,很 使满意来自某处淘豆网转载请表示出处.

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